Тестове за алергична диагностика

Тестове за алергична диагностика

Методи за диагностика на алергии. Те се извършват след идентифициране на редица предполагаеми алергени чрез задълбочено събиране на анамнеза. Пробите се извършват извън фазата на обостряне на заболяването и не по-рано от 2-3 седмици по-късно. след остра алергична реакция, тъй като през това време чувствителността на организма към алергена намалява.

Разграничаването между кожни и провокативни A. d. P. Кожните тестове се основават на идентифицирането на специфична сенсибилизация на тялото чрез въвеждане на алерген през кожата. В същото време се оценява степента и естеството на развиващия се възпалителен отговор. Разграничаване на качествени и количествени кожни тестове. С помощта на качествени кожни тестове се определя наличието или отсъствието на сенсибилизация към този алерген. Тези тестове се използват при диагностика на алергични, както и някои инфекциозно-алергични (туберкулоза, бруцелоза и др.) И паразитни (хелминтоза) заболявания. Количествените кожни тестове дават представа за степента на сенсибилизация на тялото. С тяхна помощ се определя минималната концентрация на специфичен алерген, при която той предизвиква видима алергична реакция в сенсибилизиран организъм. Този метод се нарича титруване на алергия. С негова помощ се определя дозата на алергена, с която е възможно да се започне специфична хипосенсибилизация (намаляване на нивото на сенсибилизация) чрез въвеждане на алергена в тялото.

В зависимост от използваната техника, кожните тестове могат да бъдат директни или индиректни. При директни кожни тестове алергенът се инжектира интрадермално или чрез увреждане на епидермиса чрез убождане или надраскване. При директни кожни тестове за капково и нанасяне алергенът (обикновено лекарство или вещество) се нанася върху непокътната кожа под формата на капка или апликация. Кожният отговор се счита за положителен, когато се появи хиперемия, инфилтрация или образуване на мехури. Може да се случи в рамките на 20 минути (незабавна реакция), след 6-12 часа (реакция от преходен тип), след 24-48 часа (забавена реакция). Типът кожен отговор зависи от естеството на имунологичния механизъм на алергичната реакция (вж. Алергия). Сред директните кожни тестове от различен тип най-чувствителен е интрадермалният, последван от скарификация, инжектиране, приложение, капково.

Индиректните кожни тестове включват реакцията на Prausnitz-Küstner, при която кръвният серум на пациента се инжектира интрадермално в здрав човек и след фиксиране на антителата върху кожата на реципиента (след 24 часа), алергенът се инжектира на същото място. Развитието на локална кожна реакция се оценява по наличието на антитела-реагини в тествания серум. Тази реакция не изключва възможността за пренасяне на патогена с кръвния серум при наличие на латентна инфекция при донора, поради което употребата му е ограничена. Най-целесъобразно е да се открият реагинови антитела, като се използват различни имунни реакции - ензимен имуноанализ и др. (Вж. Имунологични методи за изследване). Изборът на типа кожен тест зависи от заболяването, очакваната степен на чувствителност, естеството на алергена, а също и от реактивността на кожата. Приемът на някои лекарства (антихистамини, успокоителни) драстично намалява реактивността на кожата, поради което преди алергичен преглед е необходимо да се въздържате от приема на тези лекарства в продължение на 5-7 дни.

При диагностицирането на алергични заболявания не може напълно да се разчита на кожни тестове и да се надценяват резултатите от тях. Тестването на кожата и оценката на резултатите от тях се извършва само от специално обучен медицински персонал.

Ако има несъответствие между данните от алергичната история и резултатите от кожни тестове през периода на ремисия, се показват провокативни тестове. Тези тестове се основават на възпроизвеждането на алергични реакции чрез въвеждане на алерген в орган или тъкан, чието поражение е водещо в картината на заболяването. Разграничаване на конюнктивални, назални и инхалационни провокативни тестове. Конюнктивален провокативен тест се провежда чрез вливане на алергена в долната конюнктивална торбичка. Реакцията се счита за положителна, когато се появи конюнктивална хиперемия, сълзене и сърбеж на клепачите. Провежда се назален провокативен тест за алергичен ринит и полиноза: в едната половина на носа се вкарва алерген, а в другата се поставя контролна течност. Реакцията се счита за положителна, ако има затруднено назално дишане и сърбеж от страна на вливането на алергена. За етиологична диагностика на бронхиална астма се използва провокационен тест за инхалация: с помощта на аерозолен пулверизатор пациентът вдишва разтвор на алерген през устата. Реакцията се счита за положителна, ако жизненият капацитет на белите дробове е намален с повече от 15%.

Провокативните тестове включват и тестове за студ и топлина, използвани за студена и топла уртикария (уртикария). При липса на ясни признаци на заболяването се провежда провокационен тест за експозиция. Тя се основава на директен контакт на пациент със съмнение за алерген в средата, в която пациентът обикновено се намира. Обратното на този тест е тестът за елиминиране - елиминиране на предполагаемия алерген от диетата, прехвърляне на пациента, страдащ от домашни алергии, в така нареченото отделение без алергени и др. Левкоцитопенични и тромбоцитопенични провокативни тестове се използват при диагностицирането на хранителна алергия (хранителна алергия) и лекарствена алергия) (... Тези тестове се основават на намаляване на броя на левкоцитите и тромбоцитите в кръвта след прилагането на тестовия алерген на пациента..

Библиография: Клинична имунология и алергология, изд. Л. Йегър, прев. с него., т. 1-3, М., 1986; Pytskiy V.I., Adrianova N.V. и Артомасов А. При алергични заболявания, М., 1984; Съвременна практическа алергология, изд. АД. Адо и А.А. Полнера, М., 1963.

Алергичен метод за диагностика на инфекциозни заболявания е

Алергични тестове - биологични реакции за диагностика на редица заболявания, базирани на повишената чувствителност на организма, причинена от алерген.

При много инфекциозни заболявания, поради активирането на клетъчния имунитет, се развива повишена чувствителност на организма към патогени и техните метаболитни продукти. На това се основават алергични тестове, използвани за диагностициране на бактериални, вирусни, протозойни инфекции, микози и хелминтиази. Алергичните тестове имат специфичност, но често са положителни при болни и ваксинирани.

Всички алергични тестове са разделени на две групи - in vivo и in vitro тестове.

Алергичен метод за диагностика на инфекциозни заболявания

При редица инфекциозни заболявания тялото става свръхчувствително към бактериите, причиняващи алергени. Това явление помага за установяване на етиологична диагноза. В някои случаи специфична бактериална алергия се формира рано, в първите дни на заболяването, която се използва за ранна диагностика на туларемия (интрадермален алергичен тест с туларин става положителен на 2-рия-3-ия ден).

В други случаи алергичното преструктуриране на организма настъпва по-късно и идентифицирането на специфична алергия може да се използва в интерес на ретроспективната диагноза. Методи за хипосенсибилизация на организма с помощта на подходящи алергени се използват за лечение на пациенти с определени хронични форми на заболявания. Терапевтичното използване на бактериални алергени е оправдано в случаите, когато антибиотичната терапия и други методи на лечение не са успешни и болестта придобива хроничен рецидивиращ ход.

Понастоящем тези нозологии включват редица инфекциозни заболявания, които причиняват хронични форми на белодробна туберкулоза (увреждане на ретината), бруцелоза (повтарящ се миокардит), токсоплазмоза (увреждане на опорно-двигателния апарат).

Алергичните тестове (кожни и интрадермални) са получили всеобщо признание при диагностицирането на бактериални инфекции като туларемия, бруцелоза (тест на Бърн), туберкулоза (кожен тест на Пирке и интрадермален тест на Манту), токсоплазмоза, гъбични кожни лезии, жлези и рикетсиози (Q треска). Най-лесно се извършва кожен алергичен тест в сравнение с интрадермални и други методи за приложение на алергени.

Техниката на интрадермален алергичен тест е следната: капка алерген се нанася върху флексорната повърхност на предмишницата или върху кожата на рамото (след лечение със 70% алкохол) и чрез нея се извършва леко скарифициране (без появата на кръв!). Положителен тест (след 24 и 48 часа) при наличие на сенсибилизация на тялото към инжектирания алерген се проявява чрез възпалителна реакция с различна интензивност: зачервяване, подуване, мехури, понякога с усещане за локален сърбеж и парене.

Тежестта на реакцията и нейната продължителност зависят от състоянието на сенсибилизация на организма и концентрацията на бактериалния алерген (например при диагностициране на туберкулоза тя не трябва да бъде по-висока от 1:10 000 (!) За да се избегнат фокални реакции в белите дробове, протичащи с разрушаване (!) На белодробната тъкан).

Диагностика на вирусни инфекции

Лабораторната диагностика на вирусни инфекции се основава на откриването на вируса и антителата към него. Материалът за изследване е биологичните течности на тялото и тъканите, където вирусът се намира в най-големи количества. В зависимост от естеството и стадия на заболяването се изследват кръв, цереброспинална течност, отделяне на конюнктивата, уретрата, шийката на матката, назофарингеална слуз, изпражнения, урина и парчета органна тъкан, получени с помощта на биопсия или от труп.

За вирусологични изследвания материал от пациент се инжектира в различни лабораторни животни, в пилешки ембриони и тъканни култури; Изборът на материал и метод за изследване се определя от тропизма на вируса, присъщ на различни вирусни инфекции и способността му да се размножава in vivo и in vitro. Идентифицирането на вируса се извършва с помощта на специфични методи, използващи серологични тестове.

През последните години за диагностика се използва полимеразна верижна реакция (PCR); обхватът на индикация на различни вируси по този метод бързо се разширява. В момента е разработена вирусологична диагностика на хепатит А, В, С, D, G, TTV; определяне на херпесни вируси, цитомегаловирус, ХИВ и др. Определете не само тяхното присъствие в тестовия материал (кръв и др.), но и броя на вирусните частици (т.нар. „вирусно натоварване“ - степента на виремия и репликация на вируса), което е важно не само за диагностика, но също така и за динамично наблюдение на хода на заболяването и за оценка на ефективността на антивирусното лечение (количеството на вируса намалява, докато изчезне).

Наред с PCR, някои рутинни лабораторни методи за диагностициране на вирусни инфекции запазват своето значение: директна микроскопия на назални тампони за определяне на ДНК и РНК вируси; реакция на имунофлуоресценция (RIF), индиректна имунофлуоресценция (RNIF) при диагностициране на грип и други остри респираторни вирусни инфекции; изолиране на чисти култури от грипни вируси за определяне на техния тип.

RSK се използва широко за определяне на титъра на антителата при пациенти в хода на заболяването; реакция на инхибиране на хемаглутинацията (RTGA), която позволява да се определи степента на специфичен имунологичен отговор на тялото; се използват и неутрализационни реакции, утаяване в агар и много други специални вирусологични методи.

Значението на серологичните и алергичните методи при диагностицирането на инфекциозни заболявания.

Серологичният метод се основава на определянето на специфични антитела в кръвта към съответните патогени с помощта на различни реакции (аглутинация, пасивна хемаглутинация и др.). Серологичните реакции се използват за следните цели: 1) от известен антиген (диагностикум), съдържанието на антитела към него се определя в серума, 2) от известно антитяло (диагностичен серум), в материала се определя микробен антиген или се идентифицира изолиран патоген.

Алергичният метод се основава на откриване на повишена чувствителност на макроорганизъм към определени патогени на инфекциозни заболявания или продукти от тяхната жизнена дейност. За алергични тестове се използват лекарства, които се наричат ​​алергени..

5. Основните групи фактори за патогенност на бактериите:

1) адхезионни фактори,

2) фактори за инвазия,

3) фактори, предотвратяващи фагоцитозата,

4) фактори, потискащи фагоцитозата,

5) ензими на "защита и агресия",

6) микробни токсини (ендо- и екзотоксини).

6. Какви фактори на патогенността предотвратяват фагоцитозата и какви инхибират фагоцитозата?

Факторите, предотвратяващи фагоцитозата, блокират етапи 1 и 2 на фагоцитозата. Това е капсула, компоненти на клетъчната стена - плазмакоагулаза, пептидогликан, протеин А, протеин М, тейхоеви киселини и др. Тези фактори или маскират бактериите (хиалуронова киселина в капсулата) или потискат активността на фагоцитите.

Факторите, потискащи фагоцитозата, блокират окислителния взрив, което води до непълна фагоцитоза. Това е микрокапсула, продължителността на живота на бактериите, V-W антигените и т.н..

Фактори на адхезия и колонизация на бактериите, тяхното естество и значение.

Факторите на адхезия и колонизация са първоначалните, задействащи механизми на заболяването. С тяхна помощ бактериите разпознават рецепторите на клетъчните мембрани, укрепват и колонизират клетките. Тези фактори включват компонентите на клетъчната стена: фимбрии (къси израстъци), протеини на външната мембрана, липополизахарид, пептидогликан, тейхоеви киселини (G +).

8. Какви са факторите за инвазия? Как могат да бъдат представени?

Факторите на инвазия са фактори, чрез които бактериите навлизат в клетката. В G - те могат да бъдат представени от протеини на външната мембрана. Включва например ензима хиалуронидаза, който разрушава съединителната тъкан.

9. Какви ензими на „защита и агресия“ на бактериите познавате? Методи за тяхното откриване в бактерии.

Ензимите на "защита и агресия" насърчават разпространението на бактерии в тъканите на тялото. Те включват плазмакоагулаза, фибринолитичен ензим, лецитиназа, хиалуронидаза, DNase и др..

За да се открие хиалуронидаза, заек се инжектира интрадермално с 0,2 ml спирала във физиологичен разтвор в една област от депилираната кожа и 0,2 ml труп с добавка на филтрата от бульонна култура от стафилококи се добавя към съседната зона. Петното на мястото на инжектиране на спирала с филтрат след 24-48 часа е няколко пъти по-голямо от мястото на инжектиране на спирала без филтрат поради повишена тъканна пропускливост в присъствието на хиалуронидаза.

За да се открие фибринолитичният ензим, тестовата култура се инокулира в чашките на Петри с агарова среда, съдържаща плазма. След инкубация за 24-48 часа при 37 градуса, около колониите на бактерии, произвеждащи фибринолизин, се образува зона за изчистване.

За откриване на плазмакоагулаза, тестовата култура се инокулира в 0,2 ml цитрирана заешка или човешка плазма. В случай на производство на плазмена коагулаза, плазменото съсирване настъпва 2-4-6-18 часа след инкубацията при 37 градуса. В контрола плазмата остава течна.

За да се идентифицира лецитиназа, изследваната култура се инокулира върху жълтъчен агар. в присъствието на лецитиназа около бактериалните колонии се образува зона на мътност и дъгови венци.

Алергичен метод за диагностика на инфекциозни заболявания

Алергични тестове - биологични реакции за диагностика на редица заболявания, базирани на повишената чувствителност на организма, причинена от алерген.

При много инфекциозни заболявания, поради активирането на клетъчния имунитет, се развива повишена чувствителност на организма към патогени и техните метаболитни продукти. На това се основават алергични тестове, използвани за диагностициране на бактериални, вирусни, протозойни инфекции, микози и хелминтиази. Алергичните тестове имат специфичност, но често са положителни при болни и ваксинирани.

Всички алергични тестове са разделени на две групи - in vivo и in vitro тестове.

Алергичните тестове in vitro се основават на откриването на сенсибилизация извън тялото на пациента. Те се използват, когато по една или друга причина не могат да се извършват кожни тестове или в случаите, когато кожните реакции дават неясни резултати..

За извършване на алергични тестове се използват алергени - диагностични лекарства, предназначени да открият специфична сенсибилизация на тялото. Инфекциозните алергени, използвани за диагностика на инфекциозни заболявания, са пречистени филтрати от бульонни култури, по-рядко суспензии на убити микроорганизми или AGs, изолирани от тях.

Кожни тестове.Инфекциозни алергени инжектира се, като правило, интрадермално или кожно, чрез втриване в скарифицирани кожни участъци. При интрадермалния метод 0,1 ml от алергена се инжектира в средната трета на предната повърхност на предмишницата със специална тънка игла. След 28 - 48 часа резултатите от реакцията на ХЗТ се оценяват чрез определяне на размера на папулата на мястото на инжектиране.

Неинфекциозни алергени (растителен прашец, битов прах, хранителни продукти, лекарства и химически препарати) се инжектират в кожата с инжекция (тест за убождане), кожни чрез скарификация и триене или чрез интрадермално инжектиране на разреден разтвор на алерген. IHN се използва като отрицателна контрола, а хистаминовият разтвор се използва като положителна контрола. Резултатите се вземат предвид в рамките на 20 минути (GNT) в зависимост от размера на папулите (понякога до 20 mm в диаметър), наличието на оток и сърбеж. Интрадермални тестове се извършват в случай на отрицателен или съмнителен резултат от убоден тест. В сравнение с последните, дозата на алергена се намалява със 100-5000 пъти.

Кожните тестове за наличие на ХЗТ се използват широко за откриване на инфекция на хора с микобактерии туберкулоза (тест на Манту), причинители на бруцелоза (тест на Бърн), проказа (реакция на Мицуда), туларемия, жлези, актиномикоза, дерматомикоза, токсоплазмоза, някои хелминтиази и др..

Проби in vitro. Тези изследователски методи са безопасни за пациента, те са доста чувствителни и позволяват количествена оценка на нивото на алергизация на тялото..

В момента са разработени тестове за определяне на сенсибилизация въз основа на реакциите на Т- и В-лимфоцитите, тъканните базофили, откриването на общ специфичен IgE в кръвния серум и др. Те включват реакции на инхибиране на миграцията на левкоцитите и бластна трансформация на лимфоцити, специфично образуване на розетка, базофилен тест на Шели, реакция на дегранулация на базофили в тъканите, както и алергосорбентни методи (определяне на специфичен IgE в кръвен серум).

Инхибиране на реакцията на миграцията на левкоцитите (RTML). TML се основава на потискане на миграцията на моноцити и други левкоцити под въздействието на медиатори, произведени от сенсибилизирани лимфоцити в присъствието на специфичен алерген.

Реакция на бластна трансформация на лимфоцити (RBT).Тя реакция се основава на способността на нормалните лимфоцити от периферната кръв да влязат в митоза и да се превърнат в бластни форми по време на тяхното култивиране in vitro под въздействието на специфични фактори - алергени и неспецифични стимулатори на митогенезата - митогени (фитохемагглутинин и конканаповеласинчагипополисанцина други вещества).

Реакция на специфично образуване на розетки Розетите са характерни образувания, които възникват in vitro в резултат на адхезия на еритроцитите към повърхността на имунокомпетентните клетки. Розирането може да възникне спонтанно, тъй като човешките Т-лимфоцити съдържат рецептори за овчи еритроцити. Спонтанното образуване на розетка при здрави хора е 52 - 53% и служи като индикатор за функционалното състояние на Т-лимфоцитите. Това явление се възпроизвежда и ако се използват еритроцити, върху които са фиксирани съответните алергени..

Реакцията на дегранулация на тъканни базофили Методът се основава на факта, че под действието на алерген се извършва дегранулация на тъканните базофили на плъх, предварително сенсибилизиран с цитофилен АТ от кръвния серум на пациента.

Базофилен тест на Шели Известно е, че базофилните гранулоцити при хора или зайци също се дегранулират в присъствието на серума на пациента и алергена, към който пациентът е чувствителен.

In vitro определяне на IgE антитела. Лабораторната диагностика на заболявания, базирани на GNT, се основава на определянето на специфични за алергена IgEanti-IgE. Когато се използва радиоактивен етикет, методът се нарича радиоалергосорбентен тест (PACT), но по-често като етикет се използва ензим или флуоресцентно вещество (FAST). Време за анализ - 6 - 7 часа. Принципът на метода: известен алерген, фиксиран на твърда основа, се инкубира с кръвния серум на пациента; серумно специфичен IgE анти-IgE се свързва с алергена и по този начин остава фиксиран върху субстрата и може да взаимодейства специфично с добавените белязани анти-IgE.

MedGlav.com

Медицински справочник на болестите

Диагностика на алергични заболявания. Анамнеза, проби, тестове, имунологични изследвания за алергии.

ПРИНЦИПИ НА ДИАГНОСТИЧНАТА АЛЕРГИЯ.

Задачите за диагностициране на алергично заболяване са:

• Установяване на естеството на заболяването (алергично или неалергично). Често това може да се установи въз основа на характерните оплаквания на пациента и клиничната картина на заболяването (например при сенна хрема, серумна болест). Понякога обаче възникват значителни трудности (например при необичайни реакции при прием на лекарства, храна и др.);
• Необходимо е да се разграничи дали дадено алергично заболяване е наистина алергично или псевдоалергично, тоест е необходимо да се определи степента на участие на имунните и неимунните механизми в развитието на това заболяване;
• Важно е да се установи причината за заболяването. Познаването на причината, заедно с установяването на истинската алергична природа на процеса, поражда по-нататъшен адекватен курс на лечение, назначаване на специфична хипосенсибилизация.

Особеностите на методите за изследване са широкото използване на специфични диагностични тестове in vivo и лабораторно.

АЛЕРГОЛОГИЧНА АНАМЕЗА.

Под ръководството на академик на Академията за медицински науки на СССР А. Д. Адо, беше разработена диаграма на историята на случая, където бяха подробно формулирани въпросите за алергологичната анамнеза. Основните задачи на историята:

• Да се ​​установи дали има наследствено предразположение към алергични заболявания;
• Идентифицирайте връзката между факторите на околната среда и развитието на болестта;
• Идентифицирайте онези групи алергени или единични алергени, които биха могли да причинят алергии.

По време на разпита те откриват какви алергични заболявания са били в миналото или в момента са в семейството на пациента, как пациентът реагира на въвеждането на серуми, ваксини и лекарства; е отбелязана сезонността на заболяването, връзката му с обикновената настинка; къде и кога настъпват обостряния, какви са условията на живот и труд.

Например, пациентите, които са алергични към домашен прах, се характеризират с „елиминиращ ефект“ - подобряване на състоянието при излизане от дома.
Ако сте алергични към някои индустриални алергени, ефектът от понеделник е типичен - влошаване на работата след уикенда. Връзката с настинките обикновено се открива при пациенти с инфекциозно-алергична форма на бронхиална астма, ринит. За пациентите със сенна хрема е характерна изразена сезонност на заболяването - обострянето му по време на цъфтежа на растения, чийто прашец е алерген. Наследствено предразположение се открива при пациенти с реагинен тип алергични реакции.

По този начин разпитът на пациента вече позволява да се определят възможните алергени и да се предположи вида на алергичната реакция. Тези предположения трябва да бъдат потвърдени със специфични методи за изследване - кожни, провокативни и други тестове..

КОЖНИ ИЗПИТВАНИЯ ЗА АЛЕРГИИ.

През кожата се инжектира алерген, за да се открие специфична сенсибилизация на тялото и да се оцени степента и естеството на получения оток или възпалителна реакция. Кожните тестове (CP) обикновено се извършват в ремисия..

Разграничават: качествени и количествени, директни и пасивни кожни тестове.

• Качествените тестове отговарят на въпроса: има ли сенсибилизация към този алерген или не? Положителният тест все още не се счита за доказателство, че алергенът е причината за заболяването. Причината може да е друг алерген, с който CP не е поставен.Сенсибилизацията към алерген не винаги води до развитие на алергична реакция. Следователно при хора, които са практически здрави, е възможно да се разкрие съществуването на сенсибилизация към определени алергени (домашен прах, стрептококи и др.) Без признаци на развитие на алергична реакция.
  Алергенът може да се счита за причина за заболяването, ако положителните резултати от пробата съвпадат с данните от историята. При липса на такова съвпадение или недостатъчна експресия на CP се извършват провокативни тестове.
• Количествените тестове дават представа за степента на сенсибилизация. Те са определени да идентифицират индивидуалната чувствителност и да разрешат проблема с началните дози на алергена по време на специфична хипосенсибилизация..
• С Direct KP алергенът се прилага на изследвания пациент. С пасивна или индиректна CP, кръвният серум на пациента се инжектира интрадермално на здрав човек и след това алергенът се инжектира в серумните инжекционни места (реакция на Prausnitz-Küstner).

Времето и естеството на кожната реакция след излагане на алерген зависят от вида на алергичната реакция. Кога реагинен тип (Тип I) реакцията се появява през първите 10-20 минути. Това е кръгъл или неправилен мехур с псевдоподия. Цветът на блистера е розово или бледо с около артериална хиперемия наоколо. Тази реакция се нарича образуване на мехури, уртикарна или непосредствен тип.
За алергични процеси имунокомплексни и забавени видове (III и IV тип) кожна реакция е остро възпаление с всичките му признаци - зачервяване, подуване, треска в областта на възпалението и болезненост. Разликата между типове III и IV се крие във времето на развитие и интензивността на възпалението. При тип III възпалението е по-силно изразено, то се появява след 4-6 часа и изчезва след 12-24 часа. При тип IV възпалението достига максималното си развитие за 24-48 часа. По този начин, използвайки CP, е възможно да се определи вида на алергичната реакция към този алерген.

Видове кожни тестове (CP).

CP на приложението (syn.: кожни, епикутанни, тестове за пластир).
Използва се при алергични кожни заболявания на участъци от кожата, които не са засегнати от увреждане. Алергените най-често са различни химикали, включително лекарства. Те се използват в чиста форма или в разтвори в концентрации, които не причиняват дразнене на кожата при здрави хора. Техниката на настройка на контрола варира. Обикновено парче марля около 1 см 2 се навлажнява с разтвор на алергена и се нанася върху кожата на предмишницата, корема или гърба. След това се покрива с целофан и се закрепва с лепяща мазилка. Резултатите се оценяват след 20 минути, 5-6 часа и 1-2 дни.

Пропускателни пунктове за скарификация.
При този тип CP различни алергени се прилагат под формата на капки върху кожата на предмишницата на разстояние 2-2,5 cm и през всяка капка със скарификатор или връх на иглата, отделно за всеки алерген, се извършва увреждане на епидермиса, за да не се повредят кръвоносните съдове. Вариант на този тип CP е инжекционен тест (тест за убождане) - само епидермисът се пробива с инжекционна игла. Скарификация CP се използва в случаите, когато се подозира наличието на реагинен тип алергична реакция (с полиноза, атопична форма на бронхиална астма или ринит, оток на Квинке, уртикария). Те разкриват само реагинния тип алергия. Те се оценяват след 15-20 минути..

Интрадермални тестове.
При този тип CP алергенът се инжектира интрадермално. Тези тестове са по-чувствителни от скарификацията, но също така и по-малко специфични. При постановката им са възможни усложнения под формата на органни и общи алергични реакции. Те се използват за откриване на сенсибилизация към алергени от бактериален и гъбичен произход, както и за определяне на степента на чувствителност към алергени с неинфекциозен характер. Алергените на насекомите хименоптери често не дават положителни тестове за скарификация, поради което те също се инжектират интрадермално и реакцията се открива под формата на системни прояви. Тест с тези алергени може да се класифицира като провокативни тестове..

Реакция на Праусниц - Кюстнер - реакция на пасивна сенсибилизация на кожата.
Използвал се е за диагностициране на реагиновия тип алергични реакции, например с лекарствени, хранителни алергии и др., Както и за изследване на свойствата на реагините и определяне на техния титър. Принципът на реакцията е интрадермалното приложение на кръвен серум от пациента на здрав реципиент и последващото въвеждане на изследваните алергени в тези места. При наличие на подходящи антитела в кръвния серум, реципиентът развива незабавна кожна реакция на местата на инжектиране. Понастоящем тази реакция се използва рядко поради опасността от пренасяне на латентна инфекция с кръвен серум (хепатитен вирус и др.), Както и появата на лабораторни методи за определяне на реагините.

Интензивността на CP се оценява или чрез плюсове (от 0 до четири плюса), или от диаметъра на папулата или възпалителния фокус. Като се вземе предвид възможността за развитие на сериозни усложнения до анафилактичен шок в случай на неспазване на техниката за определяне на CP, както и сложността на интерпретацията на получените резултати, CP може да се извършва само в алергични кабинети от специално обучен персонал под наблюдението на алерголог.

ПРОВОКАЦИОННИ ИЗПИТВАНИЯ ЗА АЛЕРГИИ.

Провокативните тестове (PT) са метод за етиологична диагностика на алергични реакции, основан на възпроизвеждането на тази реакция чрез въвеждане на алерген в шоковия орган. По вида на ударния орган (т.е. органа, чиято лезия е водеща в картината на заболяването), се различават следните видове ПТ.

Конюнктивалната PT се използва за идентифициране на алергени, които причиняват развитието на алергичен конюнктивит или полиоза, което се проявява със симптомите на конюнктивит. Провежда се с повишено внимание от страх да не предизвика остра възпалителна реакция. Алергенът се влива в долната конюнктивална торбичка при концентрация, която дава слабо положителен CP. При положителна реакция се появяват лакримация, конюнктивална хиперемия, сърбеж на клепачите.

Назалната PT се използва при алергичен ринит. Най-сигурно. Алергенът в същата доза, както при конюнктивалната PT, се влива в половината от носа. При положителна реакция се появяват кихане, сърбеж в носа, ринорея, затруднено дишане през тази половина на носа. Риноскопско определяне на подуване на лигавицата на черупките, стесняване на носния проход.

Инхалираният PT обикновено се използва при бронхиална астма. Изследването се извършва във фаза на ремисия в болнична обстановка. Последното се дължи на факта, че тежка астматична атака може да се развие веднага или по-късно (след 4-24 часа), поради което пациентът трябва да бъде наблюдаван. Преди да настроите PT, характерът на принудителната VC (FVC) крива се записва на спирографа и стойността му се изчислява през първата секунда - FVC; също така се изчислява коефициентът на Tiffneau, който е съотношението на FVC; към VC като процент. При здрави хора той е 70-80%. След това субектът вдишва първо чрез инхалатора контролния разтвор и, ако няма реакция към него, последователно разтворите на алергена, започвайки от минималната концентрация до тази, която ще даде забележима реакция. Спирограмите се записват всеки път. Тестът се счита за положителен, когато FVC намалява! и съотношението на Тифньо с повече от 20%. Развитият бронхоспазъм се спира от бронходилататори. С едновременното определяне на максималната обемна скорост на издишване в различни части на кривата на издишване е възможно да се направи заключение относно местоположението на възникналата пречка (малки или по-големи дихателни пътища). Глава 19 описва PT за екзогенен алергичен алвеолит.

Студената PT се използва за студена уртикария. Парче лед или ледена бутилка се поставят върху кожата на предмишницата за 3 минути. Ако тестът е положителен, мехурчеста кожна реакция се развива 5-6 минути след спиране на действието на студа, обикновено съответстваща на формата на парче лед или бутилка.

Thermal PT се използва за термична уртикария. Бутилка за претегляне с гореща вода (40-42 ° C) се поставя върху кожата на предмишницата за 10 минути. Положителната реакция се характеризира с образуване на мехур.

Левкоцитопеничният PT се използва за етиологична диагностика на хранителни и понякога лекарствени алергии. Първо, при пациент с хранителна алергия, на фона на елиминационна диета и при условия на почивка на празен стомах, броят на левкоцитите в периферната кръв се определя два пъти в рамките на един час. След това, ако разликата между двете проучвания не надвишава 0,3 х 10 u / l, дайте храна или лекарство, което да вземете. След 30, 60 и 90 минути се брои броят на левкоцитите. Тестът се счита за положителен, когато намаляването на левкоцитите е повече от 1 х 10 u / l. В случай на лекарствени алергии трябва да се внимава да не се изследва дали има анамнеза за анафилактични реакции. Отрицателният тест не изключва сенсибилизация към тествания алерген.

Тромбоцитопеничният PT също се използва за етиологична диагностика на хранителни и понякога лекарствени алергии. Извършва се подобно на левкоцитопенична PT. Счита се за положителна, когато броят на тромбоцитите се намали с 25% или повече.

Експозиционните PT се използват като индикативни тестове. Изследователят, който няма ясни признаци на заболяването, се поставя в условия, при които предполагаемите алергени могат да бъдат например в аптека, в работилница, в обор, в мелница, на места с цъфтящи растения и др. При наличие на подходящи алергени в околната среда се развива обостряне на заболяването.

С помощта на провокативни тестове атопичните и имунокомплексните видове алергични реакции се откриват добре, по-трудно е да се открие алергична реакция със забавен тип.

ЛАБОРАТОРНИ ИЗСЛЕДВАНИЯ В АЛЕРГИИТЕ.

Различните имунологични методи за изследване са от голямо значение за идентифициране на съществуващата сенсибилизация. Предимството на тези методи е пълната им безопасност за пациентите..
Всички имунологични методи разкриват само състоянието на сенсибилизация, т.е. те показват, че този индивид вече е имал контакт с този антиген (алерген). Те не могат да служат като индикатор или доказателство, че именно към този антиген (алерген) ще се развие алергична реакция, тъй като в допълнение към сенсибилизацията са необходими редица допълнителни условия за осъществяване на алергична реакция.

Тъй като има 4 вида сенсибилизация, за диагностични цели трябва да се използват няколко метода, за да се оцени възможното участие на четирите вида сенсибилизация..

Да идентифицирам Тип Reagin (Тип I) сенсибилизация, могат да се използват следните реакции:

• радиоалергосорбентен тест (RAST), който определя IgE антитела към различни видове алергени;
• радиоимуносорбентен тест (RIST), който позволява да се определи концентрацията на общия IgE. Като се има предвид, че болестите от реагинен тип са придружени от увеличаване на общия IgE, повишената концентрация на този Ig ще бъде фактор, който отчасти потвърждава участието на реагиновия механизъм, а при липса на заболяване, той ще служи като рисков фактор за неговото развитие;
• реакцията на Шулц-Дейл е директна и пасивна. Директната реакция обикновено се използва при експерименти. За целта органът на гладката мускулатура се отстранява от сенсибилизираното животно, поставя се във вана и се записват неговите контракции. След това към ваната се добавя алерген и се оценява интензивността на спазма на гладката мускулатура. За откриване на реагини в серума на болните хора може да се използва пасивна реакция. За да направите това, парче от илеума на маймуната се поставя във ваната и след това се добавя серумът на пациента.
  Антителата са фиксирани върху червата. Последващото добавяне на алергена в присъствието на съответните антитела причинява чревна контракция.
• базофилни тестове - директни и пасивни;
• тест за специфично освобождаване на хистамин;
• тест за дегранулация на мастоцитите.

Цитотоксичен тип (II тип) със сенсибилизация могат да бъдат идентифицирани с помощта на:

• различни варианти на метода за имунофлуоресценция;
• Тест на Кумбс за автоимунна хемолитична анемия;
• радиоимунологичен метод на изследване;
• Реакция на Стефен.

• различни методи за определяне на циркулиращи имунни комплекси в биопсичен материал на комплекси, отложени в тъканите, и анализ на техния състав;
• определяне на ревматоиден фактор;
• различни методи за откриване на утаяващи антитела.

• методи за определяне на лимфокини, образувани след контакт с алерген. Най-честите реакции от този тип са реакции на инхибиране на миграцията на макрофагите и образуването на лимфотоксин.
  

Метод на имуноблотинг.

В момента най-широко използваният метод за имуноблотинг.
Имуноблотинг (имуноблот) е високо специфичен и силно чувствителен референтен метод за откриване на антитела към отделни антигени (алергени).Имуноблот е високо информативен и надежден метод. Този метод на изследване няма противопоказания..

Диагностика на алергии Immuno CAP.

През последните години бяха въведени нови технологии за по-точна тестова диагностика на алергии --- Диагностика на алергии Immuno CAP.
Наречен "Allergochip Immuno CAP".

Тестовете ImmunoCAP използват изкуствени рекомбинантни алергени, получени чрез молекулярно клониране. С тяхна помощ се получава резултат от такава точност, който не може да бъде постигнат по традиционния метод - определят се не само основните компоненти, специфични за даден алерген, но и второстепенни. "Allergochip" позволява не само точно да се открие основният алерген, но и вещества, които могат да причинят кръстосана алергия.

Този метод ви позволява да определите както леки форми на алергична реакция (дерматит), така и по-опасни (астма).
Определянето на концентрацията на IgE позволява не само диагностициране на тази алергична реакция, но и прогнозиране на по-нататъшното възможно развитие на алергии.
Друго важно предимство на тестовете ImmunoCAP е скоростта на изпълнение - четири дни. Но засега тази е налична. не за всички лаборатории.

1. Методи за микробиологична диагностика на инфекциозни заболявания: бактериологични, бактериологични, биолог, серол, алергия и самата имунна система. Техните предимства и недостатъци.

Бактериоскопски (микроскопичен) метод - набор от методи за откриване и изследване на морфологичните и тинкториални свойства на бактериите (микробите) в лабораторна култура, патологичен материал или проби от външната среда с помощта на микроскопия. Те се използват за установяване на диагнозата на инфекциозно заболяване или друг процес, причинен от микроби, както и за идентифициране на изолирана чиста култура. Методът на бактериоскопско изследване е от особено значение, ако микробът има морфологични и тинкториални характеристики или специална локализация в тъканите и клетките на тялото. Само при някои инфекции е достатъчен морфологичен преглед за поставяне на диагноза.

За диагностицирането на повечето инфекции микроскопията, като първият етап от микробиологичните изследвания, има само спомагателна, приблизителна стойност..

Стойността на бактериоскопския метод се крие в неговата простота, наличност на техники и скорост на получаване на резултати (30-60 минути или по-малко). Специфичността му обаче поради сходството на морфологията на различните видове е малка и чувствителността му е ограничена - разделителната способност на метода е средно 100 000 клетки на ml.

Микроскопските методи се състоят в подготовката на микроскопични препарати за микроскопия (естествени или оцветени чрез прости и сложни методи) от изследвания материал и тяхната микроскопия с използване на различни видове микроскопични техники (светлина, тъмно поле, фазово-контрастен, луминесцентен, електронен). В повечето случаи резултатите от микроскопските изследвания са показателни. Независимо от това, микроскопията на материала може да определи някои морфологични признаци на патогени (наличие на ядра, бичури, вътреклетъчни включвания и др.), Както и да установи наличието или отсъствието на микроорганизми в изпратените проби.

БАКТЕРИОЛОГИЧНИ МЕТОДИ

Класически бактериологични (вирусологични, микологични) изследвания (наречени „златен стандарт“ на микробиологичната диагностика). Целта му е да изолира и идентифицира патогена.

Алгоритъмът за бактериологично (вирусологично, микологично) изследване се състои от следните основни етапи:

1) първична микроскопия (по избор);

2) първична сеитба за изолиране на чиста култура;

3) натрупването на чиста култура;

4) изследване на комплекса от биологични свойства на изолираната култура и нейната идентификация. Идентифицирането на чисти култури (до вида на микроорганизма) се извършва, като се вземат предвид морфологичните, тинкториални, културни, биохимични, токсигенни и антигенни свойства на микроорганизма. Повечето изследвания включват определяне на антимикробна чувствителност при изолиран патоген. За епидемиологична оценка на ролята на микроорганизма се извършва вътревидова идентификация чрез определяне на фаговари, биовари, резистентни и др..

Класическите микробиологични изследвания имат няколко недостатъка. На първо място, това е доста продължителен процес. Минималният му период е 3-4 дни, но могат да минат много дни и дори седмици, преди изолираният патоген да бъде точно идентифициран. За някои патогенни бактерии (Vibrio cholerae, дифтерийни бактерии) са разработени ускорени методи за изолиране и идентификация, но те също така ви позволяват да получите отговор не по-рано от 36-48 часа.

Задачата на микробиологичните изследвания е да изолира микроорганизмите от изследвания материал и да идентифицира, тоест да определи техните видове.

Основата на микробиологичните изследвания е бактериологичен диагностичен метод, чиято същност е изолирането на микроорганизми в чиста култура и тяхното идентифициране.

За идентифициране на микроорганизмите се изследват следните свойства:

5. Патогенни: патогенни ензими - лецитиназа, плазмакоагулаза и др.; токсигенност - способността да се произвеждат екзотоксини (дифтериен бацил, Staphylococcus aureus) (въпросът беше обсъден подробно през предходния семестър, вижте темата "Инфекция. Патогенност и вирулентност

6. Антигенен (серологичен) (въпросът е обсъден подробно в темите на раздела "Имунитет", виж предишния семестър)

7. Фаголизируемост - способността за лизис от бактериофаги (бактериални вируси): чувствителност към терапевтични фаги (за лечение на инфекциозно заболяване) и чувствителност към диагностични фаги (в нови, типични); типиране на фаги - определяне на чувствителност към типични фаги, се извършва с цел определяне на източника и пътищата на разпространение на микроорганизмите в околната среда или сред колектива (въпросът е обсъден подробно в темата "Бактериофагия", вижте съответната тема)

8. Бактерицинова чувствителност и бактериоциногенеза: извършва се с цел определяне на източника и пътищата на разпространение на микроорганизмите в околната среда или сред колектива (виж темата "Генетика на бактериите")

9. Чувствителност към антимикробни лекарства: антибиотици, химиотерапевтични лекарства и антисептици (за лечение на инфекциозно заболяване, тема "Антибиотици"), дезинфектанти (за избор на режим на дезинфекция вижте темата "Асептика, антисептици. Дезинфекция, стерилизация").

Основният недостатък на бактериологичния метод е продължителността на изследването - от 3 до 5 дни, а в някои случаи дори повече.

Резултатите от много диагностични изследвания за откриване на патогени до голяма степен зависят от вида им, както и от времето и метода на вземане на патологичен материал. Естеството на материала се определя от клиничните характеристики на заболяването: това трябва да са тези субстрати или биологични течности, в които присъствието на патогени е най-вероятно на този етап от заболяването. Успехът на бактериологичния метод до голяма степен зависи от предварителния етап, включително събирането на тестовия материал и неговото транспортиране, регистрация на сезиране в бактериологичната лаборатория..

БИОЛОГИЧНИ МЕТОДИ

Биологичните методи са насочени към определяне на присъствието на патогенни токсини в тествания материал и към откриване на патогена (особено ако първоначалното съдържание в тестовата проба е ниско или когато патогенът не може да бъде открит чрез метода на инокулация, например при вирусни и рикетсиални заболявания).

Животните се заразяват, за да изолират чиста култура на патогена в случаите, когато тя не може да бъде получена по други методи (например, когато изследваните обекти са замърсени с чужда микрофлора, която потиска растежа на патогена; с незначително съдържание на микроорганизми или преминаването им във филтрируеми форми).

Методите включват заразяване на чувствителни лабораторни животни (чувствителни към предполагаемия патоген) с тестовия материал, последвано от изолиране на чиста култура на патогена или чрез установяване на наличието на микробен токсин и неговата природа, или възпроизвеждане на типична клинична картина..

Моделирането на експериментални инфекции при чувствителни животни е важен инструмент за изучаване на патогенезата на болестта и характера на взаимодействията в системата микроорганизми - макроорганизми. За биологични тестове се използват само здрави животни с определено телесно тегло и възраст..

Инфекциозният материал се инжектира орално, в дихателните пътища, интраперитонеално, интравенозно, интрамускулно, интрадермално и подкожно, в предната камера на окото, през черепния отвор, субоципитален (в по-голямата цистерна на мозъка). Кръв се взема от животни in vivo, ексудат от перитонеума, след смъртта, кръв, парчета от различни органи, ликвор, ексудат от различни кухини.

Недостатъци: а) необходимостта от поддържане на вивариум; б) продължителността на проучването. Освен това, дори при лабораторна инфекция, далеч не винаги е възможно да се изолира патогенът, което е особено характерно за вирусни инфекции..

СЕРОЛОГИЧНИЯТ метод се състои в определяне на титъра на специфични антитела в серума на пациента. За изпълнението му се използват различни имунни реакции, както прости (аглутинация и нейните разновидности), така и сложни (RSK, ELISA и др.).

Класическата серодиагностика се основава на:

1). Определяне на антитела към патогена в диагностичния титър;

2) Откриването на антитела към причинителя на редица инфекциозни заболявания в изследвания кръвен серум не е достатъчно за поставяне на диагноза, тъй като може да отразява наличието на пост-инфекциозен или постваксинален имунитет. Ето защо се изследват сдвоени серуми на пациента, взети през първите дни на заболяването и след 7-10 дни (понякога този интервал може да бъде по-дълъг). В този случай се оценява покачването на титъра на антителата. Увеличаването на титъра на антителата с 4 пъти или повече показва инфекциозната природа на антителата.

3) При екзотични инфекциозни заболявания, както и при хепатит, HIV инфекция и някои други заболявания, самият факт на определяне на антитела показва, че пациентът е заразен и има диагностична стойност.

Серологичният диагностичен метод се използва от края на първата до началото на втората седмица на заболяването.

За откриване на антитела към тествания серум се добавя известен антиген. Тези лекарства, наречени диагностикуми, представляват суспензия от убити микроорганизми (техните индивидуални антигени) или еритроцити (латексови частици), върху които се адсорбират микроорганизмите или техните антигени.

ЛИЧЕН ИМУНЕН ДИАГНОСТИЧЕН МЕТОД

Самоимунен метод (експрес)

Цел: търсене на антигени на микроби в патологичен материал с помощта на серологични имунни отговори (вж. Реакциите в допълнение 6 в раздел 4).

Извикват се серологични реакции на имунитет между антигени (AG) и антитела (AT). Детерминантата на хипертонията се свързва с активния център на АТ. Свързването на AG и AT се осъществява чрез водородни и хидрофобни връзки, взаимодействие на йони, кулоновски и ван дер валцови сили. Силата на връзката между AG и AT се осигурява не само от силите на свързване, но и от оптималната адаптация на активното място на AT към детерминанта на AG. Серологичните реакции протичат в две фази. Първият - специфичен невидим - е във взаимодействието на AG с AT. Втората фаза - видима - се появява в зависимост от вида на реакцията, която се определя от свойствата на AG, AT и други реакционни съставки. Има няколко вида реакции: аглутинация, утаяване (имунна дифузия), лизис, неутрализация и др..

Реакция на аглутинация

В реакцията на аглутинация (RA) антигенът участва под формата на корпускуларна частица. Това могат да бъдат суспензии на микроорганизми, телесни клетки, например еритроцити.

Когато се смесват със специфичен антисерум, визуално различимите люспи - имунните комплекси се слепват и утаяват..

Реакцията на аглутинация може да бъде настроена качествено - върху стъкло и количествено - в епруветки, където се приготвят серумни разреждания.

Непряката (пасивна) реакция на хемаглутинация (RNGA) е вид модификация на RA.

Същността му се крие във факта, че антигенните молекули се адсорбират на повърхността на еритроцитите (след обработка на еритроцитите с танин или формалин). Такива „заредени“ с AG еритроцити придобиват способността да аглутинират с имунен серум, специфичен за този AG.

Образуването на AG-AT комплекса включва и залепване на еритроцити (хемаглутинатни форми на дъното на кладенеца или епруветка под формата на „обърнат чадър“), което е лесно да се вземе предвид. По този начин еритроцитите не участват пряко в образуването на комплекса AG-AT, но служат като негови показатели.

RNGA е по-чувствителен от RA.

Реакция на Кумбс

Това е тест за откриване на непълни антитела, които не могат сами да аглутинират антигени, но са в състояние да се свържат с тях. Реакцията се провежда на етапи: еритроцитен диагностикум се добавя към кръвния серум на субекта - известни антигени, адсорбирани върху еритроцитите. След инкубация еритроцитите се измиват и се добавя заешки античовешки глобулин AT. В резултат на това антиглобулиновият серум залепва еритроцитите чрез образуваните върху тях комплекси AG-AT.

Има два типа реакция на Кумбс: директна и индиректна:

• Директен метод: откриване на анти-резус антитела, адсорбирани върху еритроцитите на новороденото.

Кръв се взема от новородено, еритроцитите се измиват, добавят се към тях

антиглобулинови антитела: реализира се явлението „решетка“ - настъпва аглутинация на видими за окото еритроцити

• Косвен метод: откриване на анти-резус антитела в майчиния серум.

/// 1. Стандартни Rh-положителни еритроцити се добавят към епруветката с майчин серум. Антирезус антителата от майчиния серум се адсорбират върху еритроцитите.

2. Въведете антиглобулинов серум (антиглобулинови антитела) в епруветката: реализира се явлението „решетка“ - настъпва аглутинация на видими за окото еритроцити

Реакция на утаяване

Фино диспергиран (разтворим антиген) участва в реакцията на утаяване (RP). При контакт с антитела - преципитини се образува утайка.

Реакцията на утаяване може да се проведе в течна среда (в тесни епруветки) и в гел (в чаши на Петри). Когато се поставя RP в тесни епруветки, течност, съдържаща един от реагентите, например прозрачен екстракт от микробни клетки (0,2 ml), се наслоява върху прозрачен утаяващ серум (0,2 ml). В положителни случаи след 1-5 минути на границата между течностите се образува сиво-бял пръстен. RP, подобно на RA, влиза в електролита, но има по-висока чувствителност.

//// Схеми на реакции на утаяване в епруветка (A) и агар (B).

Една от разновидностите на RP в гела е реакцията за определяне на токсигенността на дифтерийния бацил. За това лента от стерилна филтърна хартия, напоена с антитоксичен антидифтериен серум, се поставя в чаша на Петри върху хранителна среда. След това съдът се инокулира с тестовите култури под формата на лепенки на разстояние 0,6-0,8 cm от ръба на хартията. Съдовете се инкубират при 37 ° С в продължение на 24 часа. В присъствието на токсигенна култура на мястото на взаимодействие на токсина с антитоксина, се образуват валежи под формата на дъги (мустаци, полупръстени).

Реакция на имунофлуоресценция (RIF)

Права линия (метод на Кунс). Микроорганизмите, третирани с антитела, белязани с флуорохроми, могат да светят във флуоресцентен микроскоп.

Непряк. На първия етап микроорганизмите взаимодействат със специфичен серум. Освен това, образуваният имунен комплекс се влияе от антиглобулинов серум, белязан с флуорохром. Имунният комплекс с този конюгат свети във флуоресцентен микроскоп.

Реакция на фиксиране на комплемента (CBC)

Това е антигенна лизисна реакция (например цитолиза, бактериолиза) от антитела с участието на комплемента. Ако антигенът е бактериална клетка или вирус, тогава лизисът не е придружен от видими прояви. Следователно, за да се открие присъствието на комплекса AG + AT + комплемент в експерименталната система, където един от компонентите (AG или AT) е неизвестен, се използва индикаторната система AG + AT, където и двата компонента са известни и лизисът на антигена е добре проявен, тъй като еритроцитите се приемат като AG... Реакцията се основава на способността на комплемента - сложна система от протеини от нормален серум на гръбначни животни - да се фиксира върху комплекса AG-AT и последващ лизис на антиген. В RSC участват пет компонента: AG-AT на експерименталната система, в който един от реагентите е неизвестен, комплемента и индикаторната система.

Показател - хемолитичната система се състои от суспензия на овен еритроцити и заешки хемолитичен серум, получени чрез имунизация с овен еритроцити. Ако AG и AT в експерименталната система си съответстват, резултатът от това взаимодействие е свързването на комплемента. Индикаторната система открива свободно, несвързано допълнение. Ако комплементът остане свободен, тогава той ще се свърже с комплекса от еритроцити - хемолитичен серум и ще лизира еритроцитите. По този начин наличието на хемолиза означава отрицателен резултат от CSC, а отсъствието на хемолиза означава положителен резултат..

Метод на имуноанализ

Високочувствителен метод за откриване на AG или AT, базиран на реакцията AG-AT, използващ ензимно маркиран AG или AT.

Схематична диаграма на ензимен имуноанализ за откриване на AT е както следва. Известният AH (вирус, протеин) - диагностикум - е фиксиран върху твърдата фаза. Към него се добавя серум на субекта с неизвестен AT. След инкубация и измиване, антиген-специфичните AT остават върху антигена, ако има такива в серума на субекта. За да се открие AG-AT комплексът, към него се добавя ензимно-белязан заешки антиглобулинов серум (AGS-F). За да се получи този серум, заекът се имунизира с човешки глобулини. Полученият от заека серум е маркиран с ензим, например хрянова пероксидаза. Ако тестовият серум съдържа AT до AG (диагностикум), тогава те ще служат като антиген за антиглобулинов серум. След второто измиване образуваният AG + AT + AGS-F комплекс може да бъде открит чрез добавяне на субстрат към ензима и индикатор за продуктите от субстратното разграждане. Промяната в цвета на индикатора показва наличието на желания AT в серума на субекта.

АЛЕРГИЧЕН ДИАГНОСТИЧЕН МЕТОД.

При много инфекциозни заболявания се развива състояние на свръхчувствителност с многократно въвеждане на патогена или неговите метаболитни продукти. Това състояние, наречено инфекциозна алергия, е характерно за туберкулоза, туларемия, бруцелоза, жлези, сифилис, антракс, токсоплазмоза, паротит, херпес симплекс и редица други инфекции..

За идентифициране на инфекциозна алергия се използват алергични диагностични тестове, за които подходящ алерген се инжектира строго интрадермално. Наличието на хиперемия и инфилтрация показва положителен резултат от реакцията, т.е. наличието на инфекциозна алергия..

Алергичният диагностичен метод се основава на алергична реакция - реакция на свръхчувствителност от забавен тип (ХЗТ).

Образуването на реакцията на ХЗТ се основава не на хуморалния, а на клетъчния имунен отговор на тялото към първия (сенсибилизиращ) контакт с определен антиген. Сенсибилизацията е свързана с преобладаващата пролиферация на Т-лимфоцити, носещи рецептори, специфични за даден алерген. След това умножаващ се клон от сенсибилизирани Т-лимфоцити остава в тялото за дълго време, който реагира със специфичен алерген при повторното му навлизане в тялото..

Откриване на клетъчен имунен отговор - свръхчувствителност от забавен тип (ХЗТ), схема

* Интрадермално приложение на Ag бактерии

* След 48 - 72 часа се появява възпаление

* Измерете количеството зачервяване и папули

• Ag Tx освобождават лимфокини, активиране на TCTL, активиране на фагоцити, възпаление

DTH реакциите включват: Т-хелпери (стимулират образуването на Т-ефектори чрез IL-2) → Т-ефектори (произвеждат лимфокини - хемоаттрактанти и привличат макрофаги във фокуса на възпалението) → макрофаги (произвеждат монокинови медиатори) → мононуклеарен инфилтрат на мястото на инжектиране на алерген → стойност инфилтрацията зависи от степента на сенсибилизация на тялото и достига максимум след 24-48 часа

Алергичните диагностични тестове ви позволяват да диагностицирате туберкулоза (тест на Манту), бруцелоза (тест на Бърн), туларемия (тест с туларин), антракс (тест с антраксин), шанкър (тест на Дюкре), проказа (тест на Мицуда), а последните дори диференцират туберкулоидна (лепромин-положителна) форма от лепроматозна (лепромин-отрицателна).

Положителният алергичен кожен тест показва, че въвеждането на алергена по време на теста се повтаря, тоест индивидът е имал контакт с микробен агент в миналото. Тук се отразява основният недостатък на диагностичната стойност на кожните алергични тестове, тъй като те могат да бъдат положителни не само при заразените, но и при ваксинираните срещу тези заболявания, както и при лицата, които са имали заболявания преди много години, включително при носители, т.е. положителен тест при здрави индивиди показва само контакт с микробен антиген.

При определяне на естеството на заболяването само преходът от отрицателен кожен тест към положителен, който се наблюдава в хода на заболяването, има истинска диагностична стойност. В допълнение, обратът на реакцията, т.е. увеличаване на тежестта на нейното проявление по време на повторно изследване, също служи като основа за по-подробно изследване на инфекцията с този патоген..

При прием на някои лекарства от кортикостероидни хормони, имуносупресори, както и при някои заболявания (саркоидоза, болест на Ходжкин и някои тумори) е трудно да се вземат предвид резултатите от алергичните тестове, тъй като в тези случаи има така наречената анергия, т.е. значително намаляване на общата реактивност на кожата.

Освен това, когато се появи обрив при деца, когато детето страда от една от болестите като морбили, варицела, може да се появи и анергия и през този период, когато се извършва тест на Манту, туберкулиново положително дете може да стане временно туберкулиново отрицателно, т.е. фалшиво отрицателно резултат.